龙龙：试剂的蒸发是PCR实验中常见的问题之一，影响试剂蒸发的因素也比较多。

       蒸发是指试剂在PCR实验过程中，反应液在高温下气化，又凝结在管壁或顶盖上，形成水雾或水珠，或直接从管盖或覆膜的气隙中逸出，造成反应液浓度变化、反应液量减少，有的甚至蒸干，导致实验无效等。

       在PCR实验中，我们一般通过加热盖的办法来防止试剂蒸汽的凝结，热盖温度一般比反应液的温度高，以防止蒸汽凝结。

       对于蒸汽的泄漏，大部分人认为是热盖的压力不够所致。热盖的压力固然很重要，但这仅仅是一个方面，其实耗材也很关键。

       优质的试管，管口和盖子表面光滑，盒盖后密封性好，不易泄漏。而劣质耗材，管口不平，有径向纹路，容易造成泄漏，甚至蒸干。

       对于小体系（5-10ul）的PCR反应，大多采用96孔板进行实验。96孔板一般都采用覆膜的方式来密封，也有用硅胶盖的。如果是覆膜，塑料膜的材质、厚薄、硬度、覆膜的温度、压力、平整度等都有影响。一般选择质地柔软的、厚度较厚的膜较好。为了增加管口的密封压力，还可在热盖上增加一个柔软的、带96个凸起的硅胶垫。

       另外，PCR程序的参数设置也很重要，要选择与实际反应体系最接近的反应体系。如：实际反应体系是5ul，如果在程序设置时选择了25ul、甚至50ul，那么，试剂在95℃裂解时的温度过冲大，且动态温度平衡时间会延长。这实际上是提高了试剂的温度（可能达到98℃），并且延长了在高温段停留的时间，大大增加了试剂泄漏的风险，甚至使试剂完全蒸发（蒸干）。

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